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细胞凋亡流式数据处理(细胞凋亡流式细胞仪)

时间:2024-08-12

细胞凋亡实验中细胞培养多长时间后可以收集细胞

1、胰酶消化。消化完毕用之前收集的培养基中止消化。离心后PBS再洗一遍。离心,弃上清,细胞沉淀中加入70% 4度预冷的乙醇(PBS配制),4度放置不少于1小时(有的文献说是不少于15分钟)。之后离心去乙醇,PBS洗一遍后加入PI和DNAse,终浓度50 ug/ml,混匀,避光室温放置30 min后即可上流式细胞仪测定。

2、消化细胞 ,将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。CO2培养箱中培养48小时,使细胞长在盖片上。取出盖片,按下列顺序操作:PBS漂洗3分钟→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。盖片晾干后反扣在载玻片上,镜检。

3、培养或分离的细胞约110 6,离心沉淀后用0.3ml含10%小牛血清的PBS悬浮,移入5mlEP管中,加入0.7ml无水乙醇,置-20摄氏度下固定细胞24小时以上(用本法制定的细胞可以在-20摄氏度下保存一周甚至更长的时间)。

4、一般都要在培养瓶中长满才可以运输。因为细胞在运输过程中由于外界不是处于最佳生存状态,因此细胞会逐渐凋亡。运输如果时间久,长满的细胞都会全部死亡,如果刚复苏出一天,细胞不会那么快的爬满整个培养瓶,更容易凋落死亡。

5、流式细胞仪凋亡分析/: 在6孔板中接种细胞,观察并区分活细胞、早期凋亡等不同阶段,揭示细胞生命周期的动态变化。

6、测细胞凋亡,贴壁细胞dapi染色,最好是固定。DAPI溶液是半通透性的,不固定的话,细胞染色时间得长,染料进入细胞会比较少,所以建议是固定。DAPI 可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。DAPI溶液使用步骤:固定细胞或组织样品,经过固定后,适当洗涤除去固定剂。

bd的流式细胞仪器测凋亡怎么操作

1、检测凋亡的流式方法很多,就算是BD的机子,型号也很多,所以操作差别很大。不过原则都是一样的。

2、流式检测细胞凋亡的原理 Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ,它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine, PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的(如下图3)。

3、晚期凋亡的细胞由于DNA的断裂,因而可以出现DNA ladder,从而也就有了经典的检测方法TUNEl。流式也能进行Tunel检测,其检测原理与经典Tunel原理基本一致。以BD公司的为例,其利用TdT能将荧光素标记的dUTP标记到断裂的DNA末端,从而使凋亡的细胞具有荧光。

4、需要在散点图上先画出4个象限,位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂,在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。

5、流式细胞仪(flow cytometer)3 应用 4 参见 [编辑]原理 一束单色光(通常是激光)照到流体力学聚焦的一股流体上。若干个检测器瞄向流束和激光相交的这个点,其中一个和激光在同一直在线(称作前散射(FSC),其它几个和激光垂直(旁散射(SSC)和一个或几个荧光监测器)。

流式图四个象限怎么看凋亡

1、流式图四个象限看凋亡:在二维散点图上,PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞,annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞,而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限,位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。

2、Q1:(AnnexinV-FITC)-/PI+,此区域的细胞为坏死细胞。也可能有少数的晚期凋亡细胞在其中,甚至机械损伤的细胞也包含其中。Q2:(AnnexinV+FITC)+/PI+,此区域的细胞为晚期凋亡细胞。Q3:(AnnexinV-FITC)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。Q4:(AnnexinV-FITC)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。

3、左下为正常细胞,左上为坏死细胞;右上为晚期凋亡细胞,右下为早期凋亡细胞。检测CD4和CD8,应该还要同时染色CD 先选中CD3阳性的细胞(T细胞),把T细胞在CD4/CD8的散点图上再显示,可以分为四个象限。分别代表CD4阳性,CD8阳性,双阳性,和无染色的。

4、这四个缩写分别表示细胞凋亡流式图中十字坐标划分的四个区域,UL是上左(为碎片及损伤细胞),UR是上右(为晚期凋亡及死亡细胞),LL是下左(为阴性对照的正常细胞),LR是下右(为早期凋亡细胞)。

5、如下图所示:细胞可以分为4个象限:图4:4个象限的细胞分布图 举例:如常用于研究药物或者基因等对细胞凋亡的影响。 通过比较Control组和药物组,发现化合物可以诱导前列腺癌细胞系PC-3M的细胞凋亡,处理组(20μM)的晚期凋亡细胞比例与Control组(0μM)相比,从79%上升到139%。

流式细胞测凋亡率.数据中哪个代表凋亡率

用PI单染就可以,PI是用来测细胞周期的,在单倍体峰前如果有个亚峰则表明有凋亡,但是这个方法不是很好,坏死细胞也会包含在内。准确地说用PI单染测出的凋亡率应该是死亡细胞占细胞总数的比例。建议用AnexinV和PI双染,PI阴性和AnexinV阳性区是真正凋亡的细胞。

Q3(LR):(AnnexinV-FITC)+/PI-,此区域的细胞为早期凋亡细胞。Q4(LL):(AnnexinV-FITC)-/PI-,此区域的细胞为活细胞。通常统计细胞凋亡率时采用Q2+Q3,晚期凋亡+早期凋亡群(即所有AnnexinV阳性群)。细胞周期由G1期、S期、G2期和M期组成。

流式图四个象限看凋亡:在二维散点图上,PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞,annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞,而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限,位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。